HPK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402367

Übersicht

MAP4K1 kodiert die hämatopoetische Progenitor-Kinase 1 (HPK1), eine Serin/Threonin-Kinase der Ste20-Familie, die überwiegend in Immunzellen exprimiert wird und stromaufwärts der MAPK-Signalübertragung angesiedelt ist. HPK1 wirkt als negativer Regulator der Antigenrezeptor-Signalübertragung, indem es proximale Adapterkomplexe moduliert und die nachgeschaltete Aktivierung von JNK/p38 mitprägt, wodurch die Signalantworten des T‑Zell‑Rezeptors und des B‑Zell‑Rezeptors beeinflusst werden. Über diese Funktionen wirkt HPK1 auf Aktivierungsschwellen von Lymphozyten, die Zytokinproduktion und die Dynamik der immunologischen Synapse. Eine fehlregulierte MAP4K1/HPK1‑Aktivität wurde mit veränderter Immunhomöostase in Verbindung gebracht und in Kontexten immunvermittelter Entzündungen sowie der Tumorimmunologie als Modulator antitumoraler Immunantworten untersucht.

Das HPK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MAP4K1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MAP4K1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MAP4K1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HPK1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MAP4K1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HPK1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MAP4K1-Exone abzielen, die für die HPK1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MAP4K1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HPK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HPK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MAP4K1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HPK1 HDR-Plasmid (h) und HPK1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MAP4K1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MAP4K1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.