HP1β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403235

Übersicht

CBX1 kodiert das Heterochromatin-Protein 1 Beta (HP1β), einen konservierten Chromatin-Adaptor, der über seine Chromodomäne H3K9me2/3 erkennt und durch Interaktionen mit SUV39H-Histonmethyltransferasen und anderen Repressoren zur Chromatinkondensation beiträgt. HP1β ist an der Bildung von Heterochromatin, der transkriptionellen Stilllegung, dem Timing der DNA-Replikation und der Aufrechterhaltung der Genomstabilität beteiligt, indem es die höherstufige Chromatinarchitektur koordiniert. Außerdem wirkt es an DNA-Schadensantworten mit und beeinflusst die Wahl des Reparaturwegs, indem es die Zugänglichkeit an geschädigten Loci moduliert und die Rekrutierung von Reparaturfaktoren beeinflusst. Eine Fehlregulation von HP1β-assoziierten epigenetischen Programmen wurde mit veränderten Differenzierungszuständen und genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, wie sie in unterschiedlichen Forschungszusammenhängen zu Krebs und neurodevelopmentalen Erkrankungen beobachtet werden.

Das HP1β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CBX1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CBX1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CBX1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HP1β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CBX1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HP1β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CBX1-Exone abzielen, die für die HP1β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CBX1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HP1β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HP1β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CBX1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HP1β HDR-Plasmid (h) und HP1β HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CBX1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CBX1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.