hnRNP A/B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420896

Übersicht

Hnrnpab kodiert das heterogene nukleäre Ribonukleoprotein A/B (hnRNP A/B) der Maus, ein RNA-bindendes Protein, das mit neu entstehenden Transkripten assoziiert und das Prä‑mRNA‑Spleißen, die Auswahl alternativer Exons, die mRNA‑Stabilität sowie den nukleo‑zytoplasmatischen Transport reguliert. hnRNP A/B ist an der ko‑ und posttranskriptionellen Genregulation in Ribonukleoprotein-Komplexen beteiligt und hilft, die Dynamik des Transkriptoms während Zellproliferation und Differenzierung zu koordinieren. Über seine Funktionen in der RNA‑Prozessierung und der posttranskriptionellen Kontrolle kann eine Störung der hnRNP‑A/B‑Funktion Signalwege beeinflussen, die mit Stressantworten, Genomstabilität und Proteostase verknüpft sind. Eine dysregulierte Aktivität der hnRNP‑Familie wurde mit verändertem RNA‑Stoffwechsel bei Krebs und Neurodegeneration in Verbindung gebracht, was Hnrnpab zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien in krankheitsrelevanten Modellen macht.

Das hnRNP A/B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hnrnpab-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hnrnpab-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hnrnpab nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die hnRNP A/B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hnrnpab-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der hnRNP A/B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hnrnpab-Exone abzielen, die für die hnRNP A/B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hnrnpab-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom hnRNP A/B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom hnRNP A/B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hnrnpab-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das hnRNP A/B HDR-Plasmid (m) und hnRNP A/B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hnrnpab-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hnrnpab-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.