HMGI-C Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420880-LAC

Il gene murino **Hmga2** codifica la proteina architetturale della cromatina **HMGI-C**, un fattore non istonico che si lega a DNA ricco in AT e modula l’assemblaggio dell’enhanceosoma, influenzando programmi trascrizionali che controllano proliferazione, impegno di linea e tempistiche dello sviluppo. HMGI-C si integra con le reti di rimodellamento della cromatina e dei fattori di trascrizione per regolare finemente la progressione del ciclo cellulare, la plasticità epitelio–mesenchimale e l’autorinnovamento delle cellule staminali/progenitrici. Un’espressione deregolata di **Hmga2** è associata ad alterazioni del controllo della crescita e degli stati di differenziamento, rendendolo un nodo molecolare ampiamente utilizzato per studiare la regolazione genica nello sviluppo e i circuiti trascrizionali oncogenici. Nei modelli murini, **Hmga2** rappresenta un regolatore maneggevole delle modifiche dell’architettura genomica che accompagnano trasformazione, rigenerazione tissutale e riprogrammazione cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale HMGI-C (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Hmga2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HMGI-C (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Hmga2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HMGI-C. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Hmga2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.