HM74 Double Nickaseプラスミド (m): sc-429832-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HM74 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HM74ダブルニカースプラスミド（m）およびHM74ダブルニカースプラスミド（m2）は、Hcar2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: HM74 抗体 (D-8): sc-377292
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HM74 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-429832-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスHcar2は、Gタンパク質共役受容体HM74（GPR109Aとも呼ばれる）をコードしており、ナイアシンおよび関連代謝物に対する高親和性受容体として、主にGiシグナル伝達に共役します。HM74の活性化は細胞内cAMPを低下させ、炎症の基調、走化性、脂質代謝（取り扱い）に影響する下流経路を作動させます。これには、NF-κBに連動した転写プログラムの調節も含まれます。本受容体は免疫系およびバリア関連の細胞種で発現しており、食事・腸内細菌由来シグナル・自然免疫調節の接点における代謝物センシングの研究に用いられてきました。HM74/Hcar2シグナルの変化は、脂質異常症、動脈硬化に関連する炎症、大腸炎様病態、腫瘍関連免疫微小環境のモデルで関与が示唆されており、免疫代謝の機序解析研究において重要な標的となります。
HM74 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Hcar2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Hcar2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Hcar2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Hcar2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。