Plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-DQB1 (m): sc-420756

Présentation

H2-Ab1 code la chaîne bêta murine du CMH de classe II, fonctionnellement analogue à l’allèle humain HLA-DQB1, et forme un hétérodimère qui présente des antigènes peptidiques extracellulaires aux lymphocytes T CD4+. Cet axe de présentation antigénique soutient la sélection thymique, l’activation des lymphocytes T en périphérie et le maintien de la tolérance immunitaire grâce à un trafic régulé et au chargement des peptides dans la voie endosomale. La signalisation dépendante de H2-Ab1 influence les programmes de cytokines et les réponses immunitaires adaptatives en aval, la reliant à des mécanismes qui modulent l’inflammation et l’auto-immunité. Une expression ou une présentation peptidique du CMH de classe II dérégulée a été largement associée à une susceptibilité modifiée aux pathologies immuno-médiées et à une variabilité des réponses immunitaires spécifiques d’antigènes dans des modèles murins de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-DQB1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène H2-Ab1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du H2-Ab1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert H2-Ab1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HLA-DQB1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en H2-Ab1 pour l'étude de la signalisation de HLA-DQB1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de H2-Ab1 essentiels à la fonction de HLA-DQB1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de H2-Ab1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HLA-DQB1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HLA-DQB1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus H2-Ab1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HLA-DQB1 plasmide HDR (m) et le HLA-DQB1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie H2-Ab1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles H2-Ab1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.