HLA-DOβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420773

Descripción general

H2-Ob codifica el ortólogo murino de HLA-DOβ, una proteína no clásica asociada al MHC de clase II que forma un heterodímero con DOα en las células presentadoras de antígeno. Este complejo se localiza en compartimentos endosomales/lisosomales tardíos y modula la carga de péptidos en el MHC de clase II al regular la actividad de HLA-DM/H2-DM, configurando así el repertorio de péptidos presentados a las células T CD4+. A través de su influencia en el procesamiento endosomal de antígenos y el tráfico del MHC II, H2-Ob contribuye a la tolerancia inmunitaria, la activación de la inmunidad adaptativa y la calidad de las respuestas humorales. El desequilibrio DO/DM y la presentación antigénica alterada del MHC II son relevantes para estudios de autoinmunidad, infección y mecanismos de enfermedad inflamatoria en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HLA-DOβ (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen H2-Ob en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del H2-Ob junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de H2-Ob tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HLA-DOβ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en H2-Ob para la investigación de la señalización de HLA-DOβ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de H2-Ob críticos para la función de HLA-DOβ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de H2-Ob para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus H2-Ob. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HLA-DOβ (m) y el plásmido HDR HLA-DOβ (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología H2-Ob para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana H2-Ob definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.