HLA-DMβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406436

概要

HLA-DMBは、非古典的MHCクラスII分子であるHLA-DMのβ鎖をコードしています。HLA-DMは、後期エンドソーム区画においてCLIPの解離を促進し、高親和性のペプチド–MHC II複合体を安定化させることで、HLA-DR、-DP、-DQへのペプチド搭載を触媒します。この編集段階は、CD4+ T細胞のプライミング、胸腺での選択、末梢免疫寛容を形作る抗原処理・提示経路の中核を成します。HLA-DMの機能が変化すると、免疫ペプチドームが変動し、自己免疫や免疫調節異常に関連する炎症性シグナル伝達プログラムに影響を及ぼし得ます。そのためHLA-DMBは、HLAクラスII発現ネットワーク、インターフェロン応答性の抗原提示、疾患関連HLAハプロタイプといった文脈で広く研究されています。

HLA-DMβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHLA-DMB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HLA-DMB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HLA-DMBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HLA-DMβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HLA-DMβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HLA-DMB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HLA-DMβの機能に不可欠なHLA-DMBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HLA-DMBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HLA-DMβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHLA-DMβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HLA-DMB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HLA-DMβ HDRプラスミド（h）および HLA-DMβ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHLA-DMBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHLA-DMB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。