Plasmide CRISPR d'Activation (m) Histone Deacetylase 9 (HDAC9): sc-429766-ACT

Hdac9 code l’histone désacétylase 9 (HDAC9), une HDAC de classe IIa qui agit comme régulateur épigénétique reliant les signaux de signalisation à l’état de la chromatine et aux programmes transcriptionnels. HDAC9 navette entre le cytoplasme et le noyau et fonctionne couramment au sein de complexes corépresseurs pour moduler l’acétylation des histones et l’expression génique, influençant des processus tels que la différenciation cellulaire, le métabolisme, la signalisation inflammatoire et les réponses au stress. Dans les modèles murins, une activité d’Hdac9 altérée est fréquemment étudiée dans le contexte de la fonction des cellules immunitaires, du remodelage du muscle cardiaque et squelettique, ainsi que de la plasticité neuronale, où un remaniement transcriptionnel dépendant d’HDAC9 peut modifier le phénotype. Les voies associées à HDAC9 dérégulées sont pertinentes pour la recherche mécanistique sur des traits cardiométaboliques, la fibrose et la neuroinflammation, sans que cela n’implique des résultats thérapeutiques.

Histone Deacetylase 9 (HDAC9) Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hdac9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone Deacetylase 9 (HDAC9) Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hdac9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hdac9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone Deacetylase 9 (HDAC9). Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hdac9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone Deacetylase 9 (HDAC9) au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone Deacetylase 9 (HDAC9) dans les cellules tumorales présentant une expression de Hdac9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.