Plasmide CRISPR d'Activation (h) HIPK2: sc-402003-ACT

La HIPK2 humaine (homeodomain-interacting protein kinase 2) est une kinase sérine/thréonine qui intègre des signaux de stress et de développement pour réguler la transcription, l’apoptose, les réponses aux dommages de l’ADN et les points de contrôle du cycle cellulaire. Elle module plusieurs réseaux de signalisation, notamment les programmes transcriptionnels dépendants de p53, la voie TGF-β/SMAD et les sorties de la voie Wnt/β-caténine, via la phosphorylation de facteurs de transcription et de co-régulateurs. L’activité de HIPK2 influence la régulation génique associée à la chromatine et peut affecter la sénescence et la différenciation cellulaires. Une expression ou une signalisation dérégulée de HIPK2 a été associée à une altération des voies suppresseurs de tumeur et à des réponses au stress aberrantes, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans des modèles de stress cellulaire apparentés.

HIPK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HIPK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HIPK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HIPK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HIPK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HIPK2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HIPK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HIPK2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HIPK2 dans les cellules tumorales présentant une expression de HIPK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.