HEXB Lentiviral Activation Particles (h): sc-404765-LAC

Das humane HEXB-Gen kodiert die Beta-Untereinheit der lysosomalen β-Hexosaminidase, die sich mit der Alpha-Untereinheit zu Hex A und mit sich selbst zu Hex B zusammenschließt und so den schrittweisen Abbau von GM2-Gangliosid und verwandten Glykokonjugaten ermöglicht. Diese lysosomale Hydrolaseaktivität unterstützt den Glycosphingolipid-Katabolismus, die endolysosomale Homöostase sowie den Umsatz membranständiger Substrate während Autophagie und vesikulärem Transport. Eine veränderte HEXB-Funktion stört die Gangliosid-Clearance und die lysosomale Substratverarbeitung und macht HEXB damit zu einem zentralen Ansatzpunkt für die Untersuchung von Mechanismen lysosomaler Speicherstörungen und ihrer nachgelagerten Effekte auf die Biologie von Neuronen und Gliazellen. HEXB ist daher relevant für Modelle, die den Fettstoffwechsel, lysosomenzentrierte Stressantworten und Signalwege untersuchen, die die Substratakkumulation mit zellulärer Dysfunktion verknüpfen.

HEXB Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HEXB-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HEXB Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HEXB-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HEXB-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HEXB-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.