Plasmide CRISPR d'Activation (h) HERG: sc-401143-ACT

KCNH2 code le canal potassique humain HERG (Kv11.1) activé par le voltage, un déterminant central du courant rectificateur retardé rapide qui façonne la repolarisation du potentiel d’action cardiaque. La cinétique d’ouverture/fermeture du canal et son expression à la surface cellulaire s’intègrent aux programmes d’excitabilité membranaire et sont modulées par des voies de signalisation qui influencent la phosphorylation, le trafic intracellulaire et la protéostasie dans les cellules excitables. Les perturbations génétiques et fonctionnelles de KCNH2 sont fortement associées aux syndromes du QT long héréditaires et acquis ainsi qu’à une susceptibilité arythmogène, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de l’électrophysiologie, de la régulation des canaux ioniques et des mécanismes de cardiotoxicité. Au-delà du contexte cardiaque, l’activité de HERG sert à explorer des états cellulaires dépendants des canaux ioniques, où la conductance potassique influe sur la prolifération, les réponses au stress et la signalisation bioélectrique.

HERG Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KCNH2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HERG Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KCNH2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KCNH2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HERG. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KCNH2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HERG au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HERG dans les cellules tumorales présentant une expression de KCNH2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.