HECTD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409864

Übersicht

HECTD1 kodiert eine HECT-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase, die durch Substrat-Ubiquitinierung die Proteostase, den Proteinumsatz und die Signalstärke in unterschiedlichen zellulären Kontexten reguliert. Durch die Kontrolle des ubiquitinabhängigen Traffickings und Abbaus von Komponenten verschiedener Signalwege kann HECTD1 Prozesse wie Zellzyklusprogression, Stressantworten und zytoskelettale Dynamik beeinflussen, die von einer zeitgerechten Umgestaltung von Proteinnetzwerken abhängen. Eine dysregulierte E3-Ligase-Aktivität ist häufig mit veränderter Signaltreue und aberranten zellulären Phänotypen verknüpft, was HECTD1 zu einem relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung der Funktion des Ubiquitin-Proteasom-Systems in menschlichen Zellen macht. Forschung zu HECTD1 unterstützt mechanistische Untersuchungen dazu, wie Ubiquitinierung mit entwicklungsrelevanten und krankheitsassoziierten Signalprogrammen zusammenwirkt.

Das HECTD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HECTD1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HECTD1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HECTD1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HECTD1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HECTD1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HECTD1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HECTD1-Exone abzielen, die für die HECTD1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HECTD1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HECTD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HECTD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HECTD1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HECTD1 HDR-Plasmid (h) und HECTD1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HECTD1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HECTD1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.