Plasmide CRISPR/Cas9 KO Hbb-y (m): sc-420805

Présentation

Hbb-y code une sous-unité bêta de type hémoglobine chez la souris, qui contribue à l’assemblage du tétramère d’hémoglobine et au transport de l’oxygène dans les érythrocytes. Dans le cadre du programme de différenciation érythroïde, l’expression de Hbb-y est coordonnée avec la biosynthèse de l’hème, l’équilibre des chaînes de globine et les voies de maturation des globules rouges, régulées par des réseaux transcriptionnels érythroïdes. Des altérations des gènes de type bêta-globine peuvent perturber la stabilité de l’hémoglobine et la physiologie des globules rouges, offrant des modèles pour étudier des mécanismes pertinents pour l’anémie, les hémoglobinopathies et l’érythropoïèse de stress. Chez la souris, Hbb-y est également utile pour analyser la régulation développementale et spécifique des souches au sein du locus des gènes de la bêta-globine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Hbb-y (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hbb-y dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hbb-y, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hbb-y à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Hbb-y.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hbb-y pour l'étude de la signalisation de Hbb-y, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hbb-y essentiels à la fonction de Hbb-y
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hbb-y pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Hbb-y plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Hbb-y plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hbb-y. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Hbb-y plasmide HDR (m) et le Hbb-y (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hbb-y pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hbb-y définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.