Hbb-b2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420803

Descripción general

El gen Hbb-b2 del ratón codifica una subunidad de beta-globina que se ensambla con la alfa-globina para formar hemoglobina, el transportador de oxígeno de los eritrocitos, esencial para el suministro sistémico de oxígeno y el transporte de dióxido de carbono. Su expresión se coordina estrechamente durante la eritropoyesis mediante programas transcripcionales eritroides y la regulación del locus de las globinas, lo que favorece la maduración de los glóbulos rojos y la estabilidad del tetrámero de hemoglobina. Las variaciones en la dosis o en la secuencia de la beta-globina pueden alterar la función de la hemoglobina y la fisiología eritrocitaria, lo que convierte a Hbb-b2 en un gen modelo útil para estudiar hemoglobinopatías y mecanismos relacionados con la anemia. Como parte de la red de globinas, Hbb-b2 proporciona una lectura manejable de las vías que controlan la diferenciación eritroide, el manejo del estrés oxidativo y la biología sensible a la hipoxia.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Hbb-b2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hbb-b2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hbb-b2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hbb-b2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Hbb-b2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hbb-b2 para la investigación de la señalización de Hbb-b2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hbb-b2 críticos para la función de Hbb-b2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hbb-b2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Hbb-b2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Hbb-b2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hbb-b2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Hbb-b2 (m) y el plásmido HDR Hbb-b2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hbb-b2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hbb-b2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.