Plasmide CRISPR/Cas9 KO Gγ 5 (h): sc-407524
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Gγ 5 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Gγ 5, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Gγ 5 Antibody (3B8): sc-517161
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Gγ 5 (h) | sc-407524 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
GNG5 code la sous-unité humaine Gγ5, un composant essentiel des protéines G hétérotrimériques qui relient les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG/GPCR) activés à la signalisation en aval. En s’associant aux sous-unités Gβ, les dimères Gβγ régulent des enzymes effectrices et des canaux ioniques, modulant des voies de seconds messagers telles que adénylate cyclase/AMPc, phospholipase Cβ/IP3–DAG et PI3K–AKT. La signalisation dépendante de Gγ5 influence notamment la migration cellulaire, l’excitabilité membranaire et le remodelage du cytosquelette, et une activité altérée des voies RCPG/protéines G est fréquemment impliquée dans la cancérologie, l’inflammation, ainsi que les dysfonctionnements cardiovasculaires et neurologiques.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Gγ 5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GNG5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GNG5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GNG5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Gγ 5.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GNG5 pour l'étude de la signalisation de Gγ 5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de GNG5 essentiels à la fonction de Gγ 5
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GNG5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Gγ 5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Gγ 5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GNG5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Gγ 5 plasmide HDR (h) et le Gγ 5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GNG5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GNG5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.