Plásmido Doble Nickase (h) G_{α s}: sc-400476-NIC

GNAS codifica la subunidad alfa estimuladora de la proteína G heterotrimérica, Gαs, un mediador central de la señalización de los GPCR que activa la adenilil ciclasa para aumentar el AMPc y estimular programas transcripcionales y metabólicos dependientes de PKA y EPAC. A través de su acoplamiento a receptores diversos, Gαs regula la respuesta hormonal, el transporte iónico y decisiones del estado celular, conectándose con la señalización de CREB y con el control por retroalimentación de la dinámica de los segundos mensajeros. La desregulación de la actividad y la impronta de GNAS se ha implicado en fenotipos endocrinos y metabólicos, y las alteraciones de la señalización por AMPc se examinan con frecuencia por su papel en el control del crecimiento y la diferenciación. Como nodo en las vías GPCR–AMPc, Gαs se estudia habitualmente para cartografiar el acoplamiento receptor‑efector, la interconexión entre rutas y respuestas transcripcionales dependientes del contexto.

Gα s El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GNAS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GNAS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GNAS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GNAS alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.