Plasmide CRISPR/Cas9 KO GSTM5 (h): sc-406828

Présentation

GSTM5 code la glutathion S-transférase mu 5 (GSTM5), une enzyme de détoxification de phase II qui catalyse la conjugaison du glutathion réduit à des composés électrophiles, soutenant ainsi la défense cellulaire contre les xénobiotiques et les espèces réactives de l’oxygène. En tant que composante du réseau redox dépendant du glutathion, GSTM5 contribue au maintien de la protéostasie et à la limitation des dommages oxydatifs aux lipides, aux protéines et à l’ADN. Des variations ou une dérégulation de l’activité de la famille GSTM ont été associées à une susceptibilité modifiée au stress oxydant et à la signalisation inflammatoire, des processus fréquemment impliqués dans la carcinogenèse et les lésions tissulaires. Dans les cellules humaines, GSTM5 est souvent étudiée dans le contexte du métabolisme des composés chimiques, des réponses aux expositions environnementales et des mécanismes qui façonnent l’homéostasie redox cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GSTM5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GSTM5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GSTM5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GSTM5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GSTM5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GSTM5 pour l'étude de la signalisation de GSTM5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GSTM5 essentiels à la fonction de GSTM5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GSTM5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GSTM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GSTM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GSTM5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GSTM5 plasmide HDR (h) et le GSTM5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GSTM5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GSTM5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.