Plásmido CRISPR de Activación (h) GSTM3: sc-404418-ACT

La glutatión S-transferasa mu 3 (GSTM3) es una enzima citosólica de desintoxicación de fase II que cataliza la conjugación de glutatión a xenobióticos electrófilos y a productos reactivos de la peroxidación lipídica, contribuyendo al mantenimiento de la homeostasis redox celular. Al limitar la acumulación de intermediarios reactivos, GSTM3 influye en las respuestas al estrés oxidativo, la integridad mitocondrial y procesos de señalización posteriores vinculados a la inflamación y la supervivencia celular. Las variaciones en la expresión o la actividad de GSTM3 se han asociado con diferencias interindividuales en el metabolismo de xenobióticos y en la susceptibilidad al daño oxidativo en tejidos con alta exposición ambiental. Como parte de la red más amplia del metabolismo del glutatión, GSTM3 se estudia con frecuencia en el contexto del manejo de tóxicos, el metabolismo de fármacos y programas transcripcionales de adaptación al estrés.

GSTM3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GSTM3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GSTM3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GSTM3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GSTM3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GSTM3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GSTM3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GSTM3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GSTM3 en células tumorales con expresión de GSTM3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.