GSTM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418201

Übersicht

GSTM1 kodiert die Glutathion-S-Transferase Mu 1 (GSTM1), ein Phase-II-Detoxifikationsenzym, das die Konjugation von Glutathion an elektrophile Xenobiotika und endogene reaktive Zwischenprodukte katalysiert. Durch die Begrenzung von oxidativem Stress und von Lipidperoxidation abgeleiteten Addukten trägt GSTM1 zur zellulären Redoxhomöostase bei und unterstützt den Stoffwechsel von Arzneistoffen, Umweltchemikalien und Nebenprodukten von Entzündungen. Seine Aktivität ist mit glutathionabhängigen antioxidativen Signalwegen und weiteren zytoprotektiven Stressantworten verknüpft und beeinflusst dadurch die Anfälligkeit für oxidative DNA-Schäden. Ein genetischer Verlust oder eine verminderte Expression von GSTM1 wurde mit interindividuellen Unterschieden in der Verarbeitung toxischer Substanzen in Verbindung gebracht und in Kontexten untersucht, in denen oxidativer Stress und Karzinogenexposition zum Krankheitsrisiko beitragen.

Das GSTM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GSTM1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GSTM1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GSTM1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GSTM1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GSTM1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GSTM1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GSTM1-Exone abzielen, die für die GSTM1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GSTM1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GSTM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GSTM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GSTM1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GSTM1 HDR-Plasmid (h) und GSTM1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GSTM1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GSTM1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.