GSTM1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418201

Panoramica

GSTM1 codifica la glutatione S-transferasi mu 1 (GSTM1), un enzima di detossificazione di fase II che catalizza la coniugazione del glutatione con xenobiotici elettrofili e intermedi reattivi endogeni. Limitando lo stress ossidativo e gli addotti derivati dalla perossidazione lipidica, GSTM1 contribuisce all’omeostasi redox cellulare e sostiene il metabolismo di farmaci, sostanze chimiche ambientali e sottoprodotti dell’infiammazione. La sua attività si intreccia con le vie antiossidanti dipendenti dal glutatione e con risposte citoprotettive più ampie allo stress, influenzando la suscettibilità al danno ossidativo del DNA. La perdita genetica o la ridotta espressione di GSTM1 è stata associata alla variabilità interindividuale nella gestione dei tossici ed è stata studiata in contesti in cui lo stress ossidativo e l’esposizione a cancerogeni contribuiscono al rischio di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GSTM1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GSTM1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GSTM1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GSTM1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GSTM1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GSTM1 per lo studio della segnalazione di GSTM1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GSTM1 critici per la funzione di GSTM1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GSTM1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GSTM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GSTM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GSTM1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GSTM1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GSTM1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GSTM1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GSTM1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.