GSDMDC1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-427312-ACT

GsdmdはガスダーミンD（GSDMDC1）をコードしており、これは炎症性細胞死の実行因子として膜孔（ポア）を形成します。ガスダーミンDは、カノニカルおよびノンカノニカルなインフラマソームシグナルの下流でプロテアーゼによる切断を受けて活性化されます。カスパーゼ1またはカスパーゼ11によって切断されると、N末端断片が細胞膜上でオリゴマー化してポアを形成し、ピロトーシスを促進するとともに、IL-1βやIL-18などのサイトカイン放出を助けます。この活性は、自然免疫による感知を細胞溶解および膜修復応答と結び付け、サイトカイン成熟、アラーミン放出、抗菌防御を制御する経路と統合されます。ガスダーミンD活性の破綻は、自己炎症、敗血症様の全身性炎症、ならびにインフラマソーム駆動性の細胞死が疾患関連の免疫シグナルを形成する組織障害の文脈において、マウスモデルで関与が示されています。

GSDMDC1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Gsdmdの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GSDMDC1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Gsdmd 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGsdmd転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GSDMDC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGsdmd遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGSDMDC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGsdmd発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGSDMDC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。