GRP Double Nickaseプラスミド (h): sc-402811-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GRP Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GRPダブルニカースプラスミド（h）およびGRPダブルニカースプラスミド（h2）は、GRPを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: GRP 抗体 (E-11): sc-271045
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GRP Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402811-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRP Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402811-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ガストリン放出ペプチド（GRP）は分泌性の神経ペプチドで、主にGRP受容体（GRPR）を介してシグナルを伝達します。GRPRは、ホスホリパーゼC–IP3/DAG–PKCシグナル伝達を活性化し、細胞内Ca2+の動員を引き起こすとともに、MAPK/ERKおよびPI3K/AKT経路を介して細胞の興奮性、分泌、増殖を調節するGPCRです。神経系および末梢の神経内分泌組織において、GRPは神経伝達、概日リズムやストレス関連応答、ならびに平滑筋や消化管機能の調節に関与します。GRP–GRPRシグナルの破綻は、複数の腫瘍コンテキストにおける神経内分泌分化や有糸分裂促進プログラムに関与するとされ、また、かゆみや痛みに関わる感覚回路の研究対象にもなっています。これらの特性により、GRPは、ペプチド介在性のオートクリン／パラクリンシグナル、GPCR経路間のクロストーク、刺激依存的な転写応答を解析するうえで有用な結節点となります。
GRP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GRP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GRP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GRPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GRPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。