GRIP-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421837

Descripción general

Ncoa2 codifica GRIP-1 (proteína 1 que interactúa con el receptor de glucocorticoides), un coactivador de receptores nucleares que coordina la transcripción dependiente de hormonas al servir de puente entre receptores unidos a ligando, complejos que modifican la cromatina y la maquinaria transcripcional basal. En células de ratón, GRIP-1 actúa dentro de redes de señalización de hormonas esteroideas, incluidas las vías de los receptores de glucocorticoides, estrógenos, andrógenos, hormona tiroidea y ácido retinoico, e influye en programas génicos que regulan el desarrollo, el metabolismo, las respuestas inmunitarias y la diferenciación celular. Como miembro de la familia de coactivadores SRC/p160, GRIP-1 integra señales mediante interacciones con acetiltransferasas de histonas y factores asociados al complejo Mediator para modular la actividad de potenciadores (enhancers) y promotores. La coactivación desregulada de receptores nucleares y el control transcripcional alterado en los que participan proteínas de la familia NCOA2 se han relacionado con programas aberrantes de crecimiento y de linaje, lo que convierte a Ncoa2 en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de la regulación transcripcional en modelos pertinentes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GRIP-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ncoa2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ncoa2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ncoa2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GRIP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ncoa2 para la investigación de la señalización de GRIP-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ncoa2 críticos para la función de GRIP-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ncoa2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GRIP-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GRIP-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ncoa2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GRIP-1 (m) y el plásmido HDR GRIP-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ncoa2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ncoa2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.