Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GRASP55 Double Nickase Plasmid (h): sc-401106-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GRASP55 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GRASP55 Double-Nickase-Plasmid (h) und GRASP55 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GORASP2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GRASP55: sc-271840
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GRASP55 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401106-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRASP55 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401106-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **GORASP2** kodiert **GRASP55**, ein Golgi-Reassemblierungs- und Stapelungsprotein, das zur Aufrechterhaltung der Organisation der Golgi-Zisternen beiträgt und das Vesikel-Tethering sowie den Membrantransport zwischen ER und Golgi unterstützt. GRASP55 ist an der Bildung des Golgi-Bandes (Golgi Ribbon) beteiligt und wird mit unkonventioneller Proteinsekretion in Verbindung gebracht, wodurch es zur Proteostase und zu stressadaptiven Transportprogrammen beiträgt. Störungen der GRASP55-abhängigen Golgi-Architektur können Glykosylierung, Sekretion und die zelluläre Signalgebung verändern – Prozesse, die bei Krebs, Neurodegeneration und entzündlichen Zuständen häufig umgestaltet sind. Daher ist **GORASP2** ein nützlicher Genort, um zu untersuchen, wie die Golgi-Struktur mit der Homöostase des sekretorischen Weges und krankheitsassoziierten zellulären Phänotypen zusammenhängt.
GRASP55 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GORASP2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GORASP2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GORASP2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GORASP2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.