Plasmide CRISPR/Cas9 KO granzyme K (h): sc-407038

Présentation

GZMK code la granzyme K, une sérine protéase de type trypsine stockée dans les granules des lymphocytes cytotoxiques et libérée au niveau des synapses immunologiques afin de moduler les réponses des cellules cibles et la signalisation inflammatoire. L’activité de la granzyme K est liée aux programmes effecteurs cytotoxiques, au remodelage protéolytique de substrats intracellulaires et à des interactions avec les voies de l’apoptose et de la réponse au stress, qui influencent les lésions tissulaires et la régulation immunitaire. Dans l’immunité humaine, l’expression de GZMK est caractéristique des lymphocytes T CD8+ activés et de certains sous-ensembles de cellules NK, et elle est fréquemment utilisée comme marqueur d’activation immunitaire et de différenciation cytotoxique. Une expression dérégulée de GZMK a été associée à des microenvironnements inflammatoires et à des pathologies d’origine immunitaire, ce qui soutient son étude dans les contextes des infections, de l’auto-immunité et de l’immunologie tumorale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO granzyme K (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GZMK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GZMK, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GZMK à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine granzyme K.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GZMK pour l'étude de la signalisation de granzyme K, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GZMK essentiels à la fonction de granzyme K
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GZMK pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le granzyme K plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le granzyme K plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GZMK. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le granzyme K plasmide HDR (h) et le granzyme K (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GZMK pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GZMK définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.