GPS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406290

Übersicht

Der G‑Protein‑Signalweg‑Suppressor 2 (GPS2) ist ein multifunktionales Adapterprotein, das signalabhängige Transkription reguliert und Stress‑, Entzündungs‑ und Stoffwechselreize integriert. Am besten bekannt ist es als Bestandteil des nukleären Rezeptor‑Korepressor‑Komplexes (NCoR)/SMRT–HDAC3, wo es den Chromatinzustand moduliert und Genexpressionsprogramme reprimiert, die nachgeschaltet von Signalwegen wie TNF/NF‑κB und der MAPK‑Signalübertragung liegen. GPS2 trägt außerdem zur Kontrolle der mitochondrialen retrograden Signalübertragung und der Proteostase bei, indem es ubiquitinabhängige Prozesse und transkriptionelle Antworten auf zellulären Stress koordiniert. Eine dysregulierte GPS2‑Aktivität wurde mit veränderter Expression entzündungsbezogener Gene und mit metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als Knotenpunkt für die Untersuchung transkriptioneller Koregulation in krankheitsrelevanten Kontexten unterstützt.

Das GPS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GPS2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GPS2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GPS2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPS2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GPS2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPS2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GPS2-Exone abzielen, die für die GPS2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GPS2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GPS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GPS2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPS2 HDR-Plasmid (h) und GPS2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GPS2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GPS2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.