GPR50 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402934-ACT

GPR50は、メラトニン受容体に最も近縁なオーファンGタンパク質共役受容体（GPCR）をコードしており、神経内分泌組織で高発現しています。これらの組織では、概日リズムおよび代謝生理の調節への関与が示唆されています。GPR50自体はメラトニンに高親和性で結合しないものの、受容体間相互作用や細胞内輸送（トラフィッキング）を介してGPCRシグナル伝達を調節し、神経の興奮性やホルモン応答を形作るセカンドメッセンジャー経路に影響を与え得ます。これまでの報告では、GPR50の遺伝的変異や発現変化が、気分障害、睡眠や季節性の表現型、代謝形質と関連することが示されており、中枢神経系（CNS）およびエネルギーバランス研究における重要性を支持しています。膜受容体様タンパク質としてのGPR50は、GPCRの進化、受容体二量体化、ならびにヒト細胞モデルにおける状況依存的なシグナル伝達の研究にも利用されています。

GPR50 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPR50の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPR50 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPR50 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPR50転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPR50の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPR50遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPR50依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPR50発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPR50経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。