Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
GPR43 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401858
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- GPR43 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico GPR43, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GPR43 Anticuerpo (3B3): sc-293202
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
GPR43 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401858 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
FFAR2 codifica GPR43, un receptor acoplado a proteína G (GPCR) sensor de ácidos grasos de cadena corta (AGCC), activado por acetato, propionato y butirato producidos por la microbiota intestinal. GPR43 se acopla principalmente a las vías de Gαi/o y Gαq para modular la señalización de AMPc, el flujo de calcio intracelular y las respuestas posteriores de MAPK/ERK, influyendo en la quimiotaxis, la producción de citocinas y la regulación inmunitaria asociada a la barrera. Se expresa de forma destacada en células inmunitarias como neutrófilos y macrófagos, así como en tejidos metabólicos, conectando metabolitos microbianos con programas de homeostasis inflamatoria y energética. La desregulación de la señalización de FFAR2/GPR43 se ha asociado con trastornos inflamatorios y fenotipos metabólicos, lo que respalda estudios mecanísticos de la señalización huésped–microbioma en contextos relevantes para la enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPR43 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FFAR2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FFAR2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FFAR2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPR43.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FFAR2 para la investigación de la señalización de GPR43, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de FFAR2 críticos para la función de GPR43
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FFAR2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido GPR43 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GPR43 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FFAR2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPR43 (h) y el plásmido HDR GPR43 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FFAR2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FFAR2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.