Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR39 (m): sc-427882

Présentation

Gpr39 code pour GPR39, un récepteur couplé aux protéines G (GPCR) sensible au zinc, impliqué dans la régulation de cascades de signalisation intracellulaire qui façonnent la survie cellulaire, la sécrétion et le niveau de tonus inflammatoire. Dans les systèmes murins, l’activité de GPR39 a été associée à la modulation de voies dépendantes de l’AMPc et du Ca2+ ainsi qu’à la signalisation des kinases en aval, influençant la fonction de barrière épithéliale, la signalisation neuronale et l’homéostasie métabolique. Des altérations de la signalisation de GPR39 ont été étudiées dans des contextes incluant le dysfonctionnement métabolique, l’inflammation gastro-intestinale et des phénotypes neurocomportementaux, ce qui en fait un nœud utile pour l’exploration des voies de signalisation. En tant que récepteur membranaire intégrant des signaux extracellulaires à des sorties transcriptionnelles et métaboliques, GPR39 constitue une cible accessible pour disséquer les réseaux pilotés par les GPCR in vivo et dans des cellules en culture.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR39 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gpr39 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gpr39, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gpr39 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR39.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gpr39 pour l'étude de la signalisation de GPR39, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gpr39 essentiels à la fonction de GPR39
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gpr39 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR39 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GPR39 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gpr39. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR39 plasmide HDR (m) et le GPR39 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gpr39 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gpr39 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.