GPR172A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405622

Übersicht

SLC52A2 kodiert das humane Riboflavin-Transporterprotein GPR172A (RFVT2), einen Transporter der Plasmamembran, der die zelluläre Aufnahme von Riboflavin (Vitamin B2) vermittelt, einer Vorstufe der essenziellen Flavin-Kofaktoren FMN und FAD. Indem GPR172A flavoproteinabhängige Redoxreaktionen, den mitochondrialen oxidativen Stoffwechsel und die antioxidative Abwehr aufrechterhält, unterstützt es Signal- und Stoffwechselwege wie die Elektronentransportkette, die Fettsäureoxidation und allgemein die zelluläre Energiehomöostase. Eine Störung des Riboflavin-Transports beeinträchtigt die Aktivität flavinabhängiger Enzyme und wird mit neurometabolischen Funktionsstörungen in Verbindung gebracht. Genetische Varianten in SLC52A2 sind mit Syndromen einer Riboflavin-Transporter-Defizienz assoziiert, die periphere Nerven und Funktionen des zentralen Nervensystems betreffen, was das Gen für Studien zum Nährstofftransport und zu mitochondrialen Stressantworten relevant macht.

Das GPR172A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC52A2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC52A2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC52A2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR172A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC52A2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR172A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC52A2-Exone abzielen, die für die GPR172A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC52A2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR172A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GPR172A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC52A2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR172A HDR-Plasmid (h) und GPR172A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC52A2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC52A2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.