Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR142 (h): sc-415656

Présentation

GPR142 code le récepteur couplé aux protéines G 142, un GPCR orphelin/de classe A, enrichi dans des tissus d’importance métabolique et impliqué dans la détection des nutriments. Lorsqu’il est activé, GPR142 s’accouple à des protéines G hétérotrimériques pour réguler la signalisation par seconds messagers et des voies dépendantes du calcium qui influencent la sécrétion hormonale et, plus largement, l’homéostasie métabolique. Des études transcriptionnelles et génétiques ont associé GPR142 à des phénotypes endocriniens et métaboliques, notamment à des voies pertinentes pour la régulation du glucose et la fonction des îlots pancréatiques. En tant que récepteur de surface cellulaire, il constitue une cible accessible pour l’étude de la signalisation des GPCR, la découverte de ligands et les programmes transcriptionnels induits par le récepteur.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR142 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPR142 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPR142, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPR142 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR142.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPR142 pour l'étude de la signalisation de GPR142, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GPR142 essentiels à la fonction de GPR142
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPR142 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR142 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR142 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPR142. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR142 plasmide HDR (h) et le GPR142 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPR142 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPR142 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.