GPD1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403706-NIC

ヒトGPD1は、細胞質型グリセロール-3-リン酸デヒドロゲナーゼ1をコードしており、NADH依存性酵素としてジヒドロキシアセトンリン酸とグリセロール-3-リン酸の相互変換を触媒し、解糖系とグリセロ脂質合成、ならびに酸化還元恒常性を結び付けています。グリセロールリン酸シャトルに寄与することで、GPD1は細胞内のNADH/NAD+バランス、ミトコンドリアの電子伝達、そして栄養条件の変化に応じた脂質代謝フラックスに影響を与えます。GPD1活性の変化は、中性脂肪（トリグリセリド）の取り扱い、インスリン応答性経路、肝臓での脂質蓄積を含む代謝表現型と関連づけられており、脂肪組織および肝臓の生物学の研究において重要です。糖質利用と脂質貯蔵をつなぐ結節点として、GPD1は代謝ストレス、酸化還元バランス、エネルギー代謝の再編成のモデルでしばしば解析対象となります。

GPD1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GPD1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GPD1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GPD1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GPD1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。