GPD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403706

Übersicht

Das humane Gen GPD1 kodiert die zytosolische Glycerol-3-phosphat-Dehydrogenase 1, ein NADH-abhängiges Enzym, das Dihydroxyacetonphosphat und Glycerol-3-phosphat ineinander umwandelt und damit die Glykolyse mit der Glycerolipidsynthese sowie dem Redoxausgleich verknüpft. Über seine Funktion in der Glycerolphosphat-Shuttle und der Bildung von Vorstufen für Triglyceride und Phospholipide beeinflusst GPD1 die zytosolische NAD+/NADH-Homöostase, den Energiestoffwechsel und Programme der Lipidspeicherung. Eine veränderte GPD1-Aktivität wurde mit metabolischem Remodeling in Leber- und Fettgewebe in Verbindung gebracht und wird im Kontext von Dyslipidämie, insulinresistenzassoziierten Signalwegen und der umfassenderen mitochondrial–zytosolischen Redoxkopplung untersucht. Diese Funktionen machen GPD1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die Aufteilung des Kohlenstoffflusses zwischen Glykolyse und Lipidbiosynthese unter Nährstoffstress oder hormoneller Signalgebung zu untersuchen.

Das GPD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GPD1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GPD1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GPD1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPD1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GPD1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPD1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GPD1-Exone abzielen, die für die GPD1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GPD1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GPD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GPD1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPD1 HDR-Plasmid (h) und GPD1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GPD1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GPD1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.