GP-39 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402147-ACT

CHI3L1 codifica a glicoproteína GP-39 (YKL-40), uma proteína secretada do tipo quitinase-like que não apresenta atividade enzimática de quitinase, mas modula a remodelação da matriz extracelular, a adesão celular e a sinalização inflamatória. A GP-39 é produzida por macrófagos, neutrófilos, fibroblastos e por diversos compartimentos estromais e epiteliais, influenciando a quimiotaxia, programas angiogênicos e respostas de reparo tecidual. Ela é comumente estudada em vias ligadas à ativação da imunidade inata, redes de citocinas e remodelação fibrótica, incluindo respostas transcricionais associadas a MAPK/ERK, PI3K/AKT e NF-κB. A expressão alterada de CHI3L1/GP-39 está associada à inflamação crônica, fibrose e à biologia do microambiente tumoral, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de interação imune–estromal e dinâmica da matriz extracelular.

GP-39 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHI3L1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GP-39 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHI3L1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHI3L1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GP-39. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHI3L1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GP-39 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GP-39 em células tumorais com expressão de CHI3L1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.