Plasmide CRISPR/Cas9 KO GnT-II (h): sc-407393

Présentation

MGAT2 code la N-acétylglucosaminyltransférase II (GnT-II), une glycosyltransférase du Golgi médian qui catalyse une étape clé de la synthèse des N-glycanes complexes en ajoutant un résidu GlcNAc via une liaison β1,2 sur le bras mannose α1,6 des structures biantennaires. Cette activité influe sur la maturation des glycoprotéines qui régissent le trafic des récepteurs, l’adhérence cellule–cellule et la signalisation des facteurs de croissance, contribuant ainsi à façonner la protéostasie membranaire et les interactions extracellulaires. Des altérations du branchement et de la composition des N-glycanes dépendants de MGAT2 ont été associées à une dérégulation de la signalisation cellulaire ainsi qu’à des changements de migration et d’invasivité dans des contextes pertinents pour le cancer, et sont également liées à des troubles congénitaux de la glycosylation impliquant un défaut de maturation dans le Golgi. En conséquence, MGAT2 est fréquemment étudié en glycoprotéomique, en biologie de la voie sécrétoire et dans des analyses de voies portant sur le remodelage des N-glycanes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GnT-II (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MGAT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MGAT2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MGAT2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GnT-II.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MGAT2 pour l'étude de la signalisation de GnT-II, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MGAT2 essentiels à la fonction de GnT-II
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MGAT2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GnT-II plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GnT-II plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MGAT2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GnT-II plasmide HDR (h) et le GnT-II (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MGAT2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MGAT2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.