Plasmide CRISPR/Cas9 KO GM2/GD2 synthase (m): sc-420474

Présentation

B4galnt1 code la synthase GM2/GD2, une glycosyltransférase localisée dans l’appareil de Golgi qui transfère la N‑acétylgalactosamine à des précurseurs de gangliosides afin de générer GM2 et GD2, modulant ainsi la composition des glycosphingolipides dans les membranes cellulaires. En contrôlant l’abondance des gangliosides, elle influence l’organisation des radeaux lipidiques, les interactions cellule–cellule et les processus de signalisation importants pour le développement neuronal et la fonction synaptique. Dans les tissus de souris, l’activité de B4galnt1 contribue aux profils de glycolipides associés à la myéline et à l’homéostasie neuro-immune via la régulation d’événements de reconnaissance médiés par les glycolipides. La dérégulation de la biosynthèse des gangliosides est associée à des phénotypes neurologiques et à des modifications du paysage des antigènes de surface, faisant de B4galnt1 une cible clé pour des études mécanistiques en neurobiologie et en biologie des membranes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GM2/GD2 synthase (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène B4galnt1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du B4galnt1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert B4galnt1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GM2/GD2 synthase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en B4galnt1 pour l'étude de la signalisation de GM2/GD2 synthase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de B4galnt1 essentiels à la fonction de GM2/GD2 synthase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de B4galnt1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GM2/GD2 synthase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GM2/GD2 synthase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus B4galnt1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GM2/GD2 synthase plasmide HDR (m) et le GM2/GD2 synthase (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie B4galnt1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles B4galnt1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.