glypican-3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400256-NIC

ヒトのGPC3は、細胞表面に提示されるグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型ヘパラン硫酸プロテオグリカンであるグリピカン3（glypican-3）をコードしており、細胞外リガンドの利用可能性や受容体との結合（エンゲージメント）を調節します。グリピカン3は、Wnt/β-カテニン経路やヘッジホッグ経路を含む増殖因子シグナル伝達およびモルフォゲン経路を調節し、発生過程における増殖、分化、組織パターニングに影響を与えます。ヘパラン硫酸鎖を介して、FGFファミリーのリガンドやBMPなどの因子との相互作用を制御し、下流のMAPKをはじめとする関連シグナル出力に影響を及ぼし得ます。GPC3発現の破綻（異常）やグリピカン3を介したシグナルの変容は、がん化表現型や発生異常と関連付けられており、細胞シグナル伝達や腫瘍生物学の機構研究において重要な標的となっています。

glypican-3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GPC3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GPC3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GPC3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GPC3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。