Plasmide CRISPR/Cas9 KO Glutathione reductase (h): sc-417499

Présentation

GSR code la glutathion réductase humaine, une oxydoréductase dépendante du FAD qui régénère le glutathion réduit (GSH) à partir du glutathion oxydé (GSSG) en utilisant le NADPH, assurant ainsi l’homéostasie redox intracellulaire. En maintenant le pool de GSH, GSR favorise la détoxification des espèces réactives de l’oxygène, préserve l’état des groupements thiols des protéines et module les voies de signalisation sensibles au redox dans les compartiments cytosolique et mitochondrial. Cette activité s’articule avec les voies productrices de NADPH, telles que la voie des pentoses phosphates, et contribue aux défenses cellulaires en situation de stress oxydant, métabolique et inflammatoire. Une fonction ou une expression altérée de GSR est fréquemment étudiée dans des contextes de déséquilibre redox, notamment les phénotypes hémolytiques, les processus neurodégénératifs et l’adaptation des cellules cancéreuses au stress oxydant.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Glutathione reductase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GSR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GSR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GSR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Glutathione reductase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GSR pour l'étude de la signalisation de Glutathione reductase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GSR essentiels à la fonction de Glutathione reductase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GSR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Glutathione reductase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Glutathione reductase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GSR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Glutathione reductase plasmide HDR (h) et le Glutathione reductase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GSR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GSR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.