GluR-δ2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403400-ACT

GRID2 codifica o receptor ionotrópico de glutamato delta-2 (GluR-δ2), uma proteína semelhante a receptor, enriquecida no cerebelo, essencial para a organização de sinapses excitatórias e para a plasticidade sináptica. Em vez de funcionar como um canal convencional ativado por ligante, o GluR-δ2 atua como um organizador sináptico nas sinapses entre fibras paralelas e células de Purkinje, coordenando complexos de sinalização de receptores e remodelamento dependente de atividade. Ele contribui para processos como depressão de longa duração, maturação de espinhas dendríticas e desenvolvimento de circuitos cerebelares por meio de redes de sinalização glutamatérgica. A desregulação de GRID2 tem sido associada a fenótipos de neurodesenvolvimento e neurodegeneração caracterizados por disfunção cerebelar, incluindo vias relacionadas à ataxia.

GluR-δ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GRID2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GluR-δ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GRID2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GRID2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GluR-δ2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GRID2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GluR-δ2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GluR-δ2 em células tumorais com expressão de GRID2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.