GLT25D2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405276-ACT

COLGALT2はGLT25D2（コラーゲンβ(1-O)ガラクトシルトランスフェラーゼ）をコードしており、コラーゲン上のヒドロキシリシン残基にガラクトースを付加することでグリコシル化を開始します。これは、その後のグルコシル化および適切な細胞外マトリックス（ECM）成熟に必須の前提条件です。この翻訳後修飾は、コラーゲンの折りたたみ、分泌、線維形成（フィブリロジェネシス）、マトリックスの組織化に影響を与え、分泌経路におけるプロテオスタシスや組織特異的なマトリックス再構築とGLT25D2活性とを結び付けます。コラーゲンのグリコシル化異常は、線維化、結合組織の健全性、腫瘍関連ストローマの動態、ならびにECM組成がシグナル伝達と力学特性を調節する運動器生物学の研究において重要です。したがってGLT25D2は、コラーゲンのプロセシングが細胞—マトリックス相互作用、接着、そしてマトリックス構造に応答する下流経路にどのように影響するかを解析するための有用な結節点となります。

GLT25D2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COLGALT2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GLT25D2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COLGALT2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOLGALT2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GLT25D2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOLGALT2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGLT25D2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOLGALT2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGLT25D2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。