girdin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430846
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- girdin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico girdin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: girdin Anticuerpo (H-6): sc-393757
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
girdin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-430846 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Ccdc88a en ratón codifica girdin (también conocido como GIV), una gran proteína citoplasmática de andamiaje que integra señales de proteínas G heterotriméricas y de receptores tirosina quinasas para coordinar la remodelación de actina, la polaridad celular y la migración direccional. Girdin se localiza en el borde de avance y se asocia con reguladores del citoesqueleto para influir en procesos como la formación de lamelipodios, el tráfico vesicular y la organización epitelial. Se ha relacionado con la dinámica de la señalización PI3K–AKT y con el control de programas de crecimiento y supervivencia celular, lo que la hace relevante para estudios de morfogénesis tisular y motilidad celular patológica. Se han descrito alteraciones en vías asociadas a girdin en diversos contextos de enfermedad en los que los cambios en adhesión y migración contribuyen a la progresión, lo que respalda su investigación mecanística en sistemas de modelos murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO girdin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccdc88a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccdc88a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccdc88a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína girdin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccdc88a para la investigación de la señalización de girdin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ccdc88a críticos para la función de girdin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccdc88a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido girdin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido girdin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccdc88a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR girdin (m) y el plásmido HDR girdin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccdc88a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccdc88a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.