GIPC2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405087-ACT

GIPC2（GAIP-interacting protein, C terminus 2）はPDZドメインを含むアダプタータンパク質で、膜関連シグナル伝達複合体の構築や受容体トラフィッキングの制御に関与すると考えられています。PDZを介したタンパク質間相互作用により、GIPC2はエンドサイトーシス後のソーティング、小胞輸送、ならびに下流シグナルの伝播に影響し、細胞極性、遊走、増殖制御プログラムの形成に関与し得ます。GIPCファミリーのアダプターにおける発現パターンの変化は、がん生物学や受容体回転の異常を伴う他の疾患でシグナル回路の破綻と関連付けられており、状況依存的な転写状態および表現型の観点からGIPC2を検討する意義が支持されています。GIPC2の制御機構を研究することは、足場タンパク質が細胞表面受容体の動態を細胞内経路へどのように結び付け、細胞挙動を制御するのかを明らかにする助けとなります。

GIPC2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GIPC2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GIPC2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GIPC2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGIPC2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GIPC2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGIPC2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGIPC2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGIPC2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGIPC2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。