Plasmide CRISPR/Cas9 KO GFRαL (m): sc-436523

Présentation

Le gène murin **Gfral** code **GFRαL (GFRAL)**, un co-récepteur ancré par **glycosylphosphatidylinositol (GPI)** qui se lie sélectivement à **GDF15** et transmet le signal via la tyrosine kinase réceptrice **RET**. Cette voie active en aval les cascades de signalisation **MAPK/ERK** et **PI3K/AKT** afin de réguler les circuits neuronaux contrôlant l’équilibre énergétique, le comportement alimentaire et l’homéostasie métabolique systémique. L’expression de **GFRAL** est enrichie dans des régions du **tronc cérébral** impliquées dans le contrôle de l’appétit, reliant la signalisation **GDF15–GFRAL–RET** à la régulation du poids corporel et à des réponses de type anorexique associées au stress dans des modèles précliniques. En conséquence, **Gfral** est largement étudié dans la signalisation neuro-métabolique, la biologie liée à la cachexie et les mécanismes reliant des signaux inflammatoires à la régulation centrale du métabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GFRαL (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gfral dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gfral, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gfral à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GFRαL.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gfral pour l'étude de la signalisation de GFRαL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gfral essentiels à la fonction de GFRαL
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gfral pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GFRαL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GFRαL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gfral. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GFRαL plasmide HDR (m) et le GFRαL (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gfral pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gfral définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.