GCN1L1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411545

Descripción general

GCN1 (que codifica GCN1L1) es un cofactor conservado de la respuesta integrada al estrés que sustenta el control de la traducción dependiente de la detección de aminoácidos a través del eje GCN2–eIF2α. Al facilitar la activación de las quinasas de eIF2α bajo limitación de nutrientes y estrés asociado a los ribosomas, GCN1L1 contribuye a una atenuación global de la traducción y a la inducción selectiva de programas adaptativos al estrés, como la transcripción dependiente de ATF4. Esta regulación vincula a GCN1L1 con la proteostasis, las respuestas al estrés oxidativo y mitocondrial, y una homeostasis metabólica más amplia. La desregulación de la señalización de estrés traduccional y de las vías de respuesta a nutrientes en las que actúa GCN1L1 se ha asociado con fenotipos relevantes para la biología del cáncer, la neurodegeneración y los estados inflamatorios, lo que respalda estudios mecanísticos en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GCN1L1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GCN1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GCN1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GCN1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GCN1L1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GCN1 para la investigación de la señalización de GCN1L1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GCN1 críticos para la función de GCN1L1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GCN1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GCN1L1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GCN1L1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GCN1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GCN1L1 (h) y el plásmido HDR GCN1L1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GCN1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GCN1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.