Plasmide CRISPR/Cas9 KO GBP5 (h): sc-403674

Présentation

La protéine 5 liant le guanylate (GBP5) est une grande GTPase inductible par les interférons, qui agit comme effecteur antimicrobien et immunorégulateur dans les cellules immunitaires innées. Elle participe aux programmes de signalisation des interférons et a été associée à la régulation de l’inflammasome, notamment via la modulation de la production de cytokines de la famille de l’IL‑1 lors de la détection des agents pathogènes. GBP5 contribue aux réponses de défense de l’hôte contre les microbes intracellulaires et façonne des réseaux de signalisation inflammatoire qui recoupent NF‑κB et des états transcriptionnels pilotés par les cytokines. Une expression dérégulée de GBP5 a été associée à des pathologies inflammatoires et à des signatures de maladies liées à l’immunité, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’activation myéloïde, de la biologie des infections et de l’immunométabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GBP5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GBP5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GBP5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GBP5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GBP5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GBP5 pour l'étude de la signalisation de GBP5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GBP5 essentiels à la fonction de GBP5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GBP5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GBP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GBP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GBP5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GBP5 plasmide HDR (h) et le GBP5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GBP5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GBP5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.