GATA-2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420494-LAC

O gene Gata2 de camundongo codifica o fator de transcrição GATA-2, uma proteína ligante de DNA do tipo “dedo de zinco” que regula programas gênicos que controlam a manutenção de células-tronco e progenitoras hematopoéticas, o comprometimento de linhagem e o desenvolvimento vascular. O GATA-2 coordena redes transcricionais com outros reguladores hematopoéticos e cofatores associados à cromatina para ajustar a atividade de enhancers e as saídas de sinalização responsivas a citocinas durante o desenvolvimento e a homeostase. A atividade desregulada de GATA-2 perturba a autorrenovação de células-tronco e as trajetórias de diferenciação e é frequentemente investigada em modelos de falência medular, mielodisplasia, biologia de leucemias e disfunção endotelial. Essas funções tornam o Gata2 um nó central para o estudo do controle transcricional da hematopoiese, da biologia vascular e da regulação gênica responsiva ao estresse em sistemas murinos.

As Partículas de Ativação Lentivirais GATA-2 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Gata2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais GATA-2 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Gata2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de GATA-2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Gata2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.