Plasmide CRISPR/Cas9 KO GalNAc-T2 (m): sc-430824

Présentation

Galnt2 code la polypeptide N‑acétylgalactosaminyltransférase murine GalNAc‑T2, une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui initie la glycosylation O liée de type mucine en transférant du GalNAc sur des résidus sérine/thréonine de protéines sécrétées et membranaires. En modulant la composition et la densité des O‑glycanes, GalNAc‑T2 influence le repliement des protéines, leur sensibilité aux protéases, les interactions récepteur–ligand et l’organisation de la matrice extracellulaire. Ce programme de glycosylation s’articule avec le contrôle qualité de la voie de sécrétion et peut moduler la signalisation et la communication cellule–cellule via des modifications du trafic des glycoprotéines et de leur présentation à la surface. Une O‑glycosylation dérégulée est largement impliquée dans l’inflammation, des phénotypes métaboliques et le remodelage tumoral des glycanes, faisant de Galnt2 un nœud pertinent pour étudier des changements du glycoprotéome en lien avec des mécanismes de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GalNAc-T2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Galnt2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Galnt2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Galnt2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GalNAc-T2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Galnt2 pour l'étude de la signalisation de GalNAc-T2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Galnt2 essentiels à la fonction de GalNAc-T2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Galnt2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GalNAc-T2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GalNAc-T2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Galnt2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GalNAc-T2 plasmide HDR (m) et le GalNAc-T2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Galnt2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Galnt2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.