Plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-9 (m): sc-421420

Présentation

Le gène murin **Lgals9** code la galectine‑9, une lectine se liant aux β‑galactosides qui intervient dans des interactions cellule‑cellule et cellule‑matrice dépendantes des glycannes et module la signalisation immunitaire et inflammatoire. La galectine‑9 régule l’activation, l’adhésion et le trafic des leucocytes, et est associée à des voies contrôlant les réponses aux cytokines, la régulation des lymphocytes T et la polarisation des cellules myéloïdes. Par ses fonctions d’immunorégulation et d’homéostasie tissulaire, **Lgals9** est fréquemment étudié dans des modèles d’auto‑immunité, d’infection, d’allergie et d’immunologie tumorale, ainsi que dans des contextes de fibrose et d’inflammation chronique. Une expression altérée de la galectine‑9 a également été associée à des changements de sensibilité à l’apoptose et aux réponses au stress, qui influencent des microenvironnements pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-9 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lgals9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lgals9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lgals9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine galectin-9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lgals9 pour l'étude de la signalisation de galectin-9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lgals9 essentiels à la fonction de galectin-9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lgals9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le galectin-9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le galectin-9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lgals9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le galectin-9 plasmide HDR (m) et le galectin-9 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lgals9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lgals9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.