galectin-8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424987

Übersicht

Das Mausgen *Lgals8* kodiert Galectin-8, ein Tandem-Repeat-β-Galaktosid-bindendes Lektin, das Glykane auf Zelloberflächen- und Extrazellulärmatrix-Proteinen erkennt und dadurch Zelladhäsion, Migration sowie integrinabhängige Signalwege reguliert. Galectin-8 fungiert als Schadenssensor, indem es an freiliegende Wirtsglykane auf rupturierten Endomembranen bindet, selektive Autophagie fördert und angeborene Immunantworten auf intrazellulären Stress und Infektionen koordiniert. Über lektinvermittelte Kreuzvernetzung und Signalgebung moduliert es Netzwerke inflammatorischer Zytokine und die zelluläre Homöostase und greift dabei in Signalwege ein, die Endozytose, Zytoskelettdynamik und vesikulären Transport steuern. Eine fehlregulierte Galectin-8-Aktivität wurde mit veränderten Entzündungszuständen, fibroseassoziiertem Remodeling und der Biologie des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht und ist damit für mechanistische Studien zur Immunregulation und Gewebepathologie in Mausmodellen relevant.

Das galectin-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lgals8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lgals8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lgals8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die galectin-8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lgals8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der galectin-8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lgals8-Exone abzielen, die für die galectin-8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lgals8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom galectin-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom galectin-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lgals8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das galectin-8 HDR-Plasmid (m) und galectin-8 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lgals8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lgals8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.