GALC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401025

概要

GALCは、ガラクトシルセラミドやサイコシンなどのガラクト脂質を分解するリソソーム加水分解酵素であるガラクトセレブロシダーゼをコードしており、スフィンゴ脂質のターンオーバーおよびミエリン脂質の恒常性維持を支えています。リソソーム依存的な膜脂質リサイクルに関与することで、GALCはリソソーム機能を、スフィンゴ脂質代謝のより広範な経路、細胞ストレス応答、ならびに神経・グリア生理と結び付けています。GALC活性の変化は、サイコシンの処理異常やミエリン関連脂質バランスの破綻と関連しており、白質ジストロフィーの機序やリソソーム駆動性の神経変性過程の研究において重要です。ヒト細胞では、GALCはリソソーム脂質分解が膜組成、輸送、細胞生存性をどのように規定するかを解析するうえで有用な結節点となります。

GALC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGALC遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GALC内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GALCのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GALCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GALCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GALC欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GALCの機能に不可欠なGALCエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GALCゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GALC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGALC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GALC遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GALC HDRプラスミド（h）および GALC HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGALCホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGALC標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。